Декларация ифнс: Формы налоговых деклараций по налогу на доходы физических лиц

Содержание

Минфин ужесточает правила подачи налоговых деклараций

Налоговая декларация будет признаваться неподанной, если ее подаст человек, не уполномоченный представлять организацию. Такая новация содержится в новом законопроекте о внесении изменений в ст. 80 и 88 ч. I Налогового кодекса (НК) РФ. Основаниями для непринятия налоговой декларации также могут оказаться недостоверные сведения об организации или ее отсутствие в ЕГРЮЛе, исключение компании или ИП из реестра. В случае выявления хотя бы одного из указанных признаков в налоговой отчетности она будет считаться неподанной. Это может усложнить работу компаний, считают юристы.

Сейчас ФНС может принять или отказать в приеме при подаче декларации не в ту налоговую; без подписи ответственного лица; без документов, удостоверяющих личность ответственного физического лица. При этом перечень оснований для отказа может отличаться для деклараций в электронном и бумажном виде, говорится в приказе ФНС от 08.07.2019 № ММВ-7-19/343.

В законе эти основания не перечислены, обращают внимание юристы. «На практике отказы в приеме деклараций по основаниям, предусмотренным в проекте закона, существовали и ранее, однако их перечень был урегулирован только на уровне ведомственных актов ФНС, – поясняет партнер налоговой практики CMS Russia Гайк Сафарян. – При этом в НК РФ прямо закреплено, что налоговый орган не вправе отказать в принятии налоговой декларации, если она предоставлена налогоплательщиком в установленной для этого форме».

Уже сейчас налоговая может не принять декларацию по причинам, перечисленным в законопроекте. «Например, ИФНС может отказать в приеме декларации, если она подписана лицом, у которого отсутствуют полномочия подтверждать достоверность и полноту указанных сведений», – отмечает партнер юридической компании «Генезис» Василий Сосновский. Однако чаще всего налоговики идут навстречу налогоплательщику и принимают декларации даже с изъянами, а исправить недочеты сейчас можно без риска каких-либо санкций, указывает юрист.

Законопроект Минфина направлен на борьбу с подачей притворных деклараций. «Минфин четко хочет определить в НК шесть оснований, при наличии которых налоговая инспекция сможет отказать в приеме деклараций», – поясняет Сосновский. Хотя от новых правил могут пострадать и добросовестные налогоплательщики. «На практике иногда случаются ситуации, когда работающие организации не могут сдать декларацию по НДС из-за необоснованного отказа ФНС, – приводит пример руководитель департамента бухгалтерского учета аудиторско-консалтинговой группы «Градиент Альфа» Анна Шаталова. – Такая декларация сдается исключительно в электронном формате. Если ее не принимают, организации грозит не только штраф за несвоевременную сдачу декларации, но и приостановление операций по банковским счетам (из-за несдачи декларации в течение 10 дней). Также возникнут проблемы у контрагентов-покупателей, которые не смогут подтвердить вычеты по НДС, пока не будет принята электронная декларация у организации-поставщика». При новых требованиях риск возникновения таких ситуаций может возрасти.

При этом юристы обращают внимание, что предложенный перечень оснований лишь усложнит деятельность добросовестных организаций и почти не повлияет на мошеннические. «Предложенный перечень оснований недостаточный для того, чтобы выявлять новых недобросовестных налогоплательщиков, – замечает Сосновский. – Владельцы фирм-однодневок смогут его обойти, например, с помощью использования электронной цифровой подписи, оформленной на номинальных директоров».

Изменения в сфере налогообложения на имущество

Все конфигурации

1С:ERP Управление предприятием 2,5

1С:ERP Управление предприятием 2. 4

1С:ERP. Управление холдингом

1С:Управление холдингом 8

Бухгалтерия Некоммерческой организации Корп

Бухгалтерия некоммерческой организации Проф

Бухгалтерия предприятия КОРП, редакция 2. 0

Бухгалтерия предприятия КОРП, редакция 3.0

Бухгалтерия предприятия, редакция 2.0

Бухгалтерия предприятия, редакция 3.0

Зарплата и управление персоналом КОРП, редакция 2. 5

Зарплата и управление персоналом, редакция 3

Зарплата и управление персоналом, редакция 3 LTS

Комплексная автоматизация, редакция 2,4

Комплексная автоматизация, редакция 2. 5

Налогоплательщик

Платежные документы

Розница, редакция 2.3

Садовод

Управление нашей фирмой

Управление производственным предприятием, редакция 1. 3

Управление торговлей, редакция 10.3

Управление торговлей, редакция 11

Официальное опубликование правовых актов ∙ Официальный интернет-портал правовой информации

Приказ Федеральной налоговой службы от 23.

03.2021 № ЕД-7-21/215@
«Об утверждении формы, порядка ее заполнения, формата и порядка представления в налоговый орган по субъекту Российской Федерации сведений о кадастровых номерах земельных участков, предоставленных на праве постоянного (бессрочного) пользования федеральным органам исполнительной власти, федеральным государственным органам, в которых федеральными законами предусмотрена военная служба (приравненная к ней служба), федеральному органу исполнительной власти, уполномоченному по контролю и надзору в области таможенного дела, и находящимся в их ведении органам и иным лицам и относящихся к земельным участкам, изъятым из оборота в соответствии с законодательством Российской Федерации, и к земельным участкам, ограниченным в обороте в соответствии с законодательством Российской Федерации, предоставленным для обеспечения обороны, безопасности и таможенных нужд»

(Зарегистрирован 21.05.2021 № 63565)
PDF-файл: 2136 Кб (18 стр.

) Номер опубликования: 0001202105240026 Дата опубликования: 24.05.2021

Номер опубликования: 0001202105240026
Дата опубликования: 24.05.2021

Номер опубликования: 0001202105200015
Дата опубликования: 20.05.2021

Номер опубликования: 0001202105190031
Дата опубликования: 19.

05.2021

Приказ Федеральной налоговой службы от 19.02.2021 № ЕД-7-21/152@
«Об утверждении формы и формата представления сведений о лицах, в отношении которых приняты решения о назначении пенсии, прекращении выплаты пенсии, о лицах, соответствующих условиям, необходимым для назначения пенсии в соответствии с законодательством Российской Федерации, действовавшим на 31 декабря 2018 года, о лицах, относящихся к ветеранам боевых действий, сведения о которых размещены в Единой государственной информационной системе социального обеспечения, а также о лицах, сведения о которых внесены в федеральный реестр инвалидов, порядка заполнения указанной формы и признании утратившим силу приказа Федеральной налоговой службы от 12.11.2019 № ММВ-7-21/567@»
(Зарегистрирован 17.05.2021 № 63481)
PDF-файл: 2755 Кб (18 стр.

) Номер опубликования: 0001202105170071 Дата опубликования: 17.05.2021

Номер опубликования: 0001202105170071
Дата опубликования: 17.05.2021

Номер опубликования: 0001202105140036
Дата опубликования: 14.05.2021

Номер опубликования: 0001202104280034
Дата опубликования: 28. 04.2021

Номер опубликования: 0001202104260012
Дата опубликования: 26.04.2021

Номер опубликования: 0001202104260002
Дата опубликования: 26.04.2021

Номер опубликования: 0001202104230001
Дата опубликования: 23. 04.2021

10.

Номер опубликования: 0001202104230010
Дата опубликования: 23.04.2021

11.

Номер опубликования: 0001202104210001
Дата опубликования: 21.04.2021

12.

Номер опубликования: 0001202104200065
Дата опубликования: 20. 04.2021

13.

Номер опубликования: 0001202104120033
Дата опубликования: 12.04.2021

14.

Номер опубликования: 0001202104120046
Дата опубликования: 12.04.2021

15.

Номер опубликования: 0001202104060048
Дата опубликования: 06. 04.2021

16.

Номер опубликования: 0001202103260018
Дата опубликования: 26.03.2021

17.

Номер опубликования: 0001202103180031
Дата опубликования: 18.03.2021

18.

Номер опубликования: 0001202103170012
Дата опубликования: 17. 03.2021

19.

Номер опубликования: 0001202103170043
Дата опубликования: 17.03.2021

20.

Номер опубликования: 0001202103160041
Дата опубликования: 16.03.2021

21.

Номер опубликования: 0001202103120043
Дата опубликования: 12. 03.2021

22.

Номер опубликования: 0001202103110030
Дата опубликования: 11.03.2021

23.

Номер опубликования: 0001202103020026
Дата опубликования: 02.03.2021

24.

Номер опубликования: 0001202102120022
Дата опубликования: 12. 02.2021

25.

Приказ Федеральной налоговой службы от 14.01.2021 № ЕД-7-21/9@
«Об утверждении форм документа о выявлении оснований, препятствующих применению порядка представления налоговой декларации по налогу на имущество организаций, предусмотренного пунктом 1.1 статьи 386 Налогового кодекса Российской Федерации, документа о выявлении оснований, препятствующих применению налогового вычета в соответствии с уведомлением о выбранном земельном участке, в отношении которого применяется налоговый вычет по земельному налогу, документа о выявлении оснований, препятствующих предоставлению налоговой льготы в соответствии с уведомлением о выбранном объекте налогообложения, в отношении которого предоставляется налоговая льгота по налогу на имущество физических лиц, уведомления о прекращении исчисления налога на имущество физических лиц в связи с гибелью или уничтожением объекта налогообложения, сообщения об отсутствии основания для прекращения исчисления налога на имущество физических лиц в связи с гибелью или уничтожением объекта налогообложения»
(Зарегистрирован 11.

02.2021 № 62464)
PDF-файл: 392 Кб (7 стр.) Номер опубликования: 0001202102120002 Дата опубликования: 12.02.2021

Номер опубликования: 0001202102120002
Дата опубликования: 12.02.2021

26.

Номер опубликования: 0001202102040020
Дата опубликования: 04.02.2021

27.

Номер опубликования: 0001202102030037
Дата опубликования: 03.02.2021

28.

Номер опубликования: 0001202101290020
Дата опубликования: 29.01.2021

29.

Номер опубликования: 0001202101290015
Дата опубликования: 29. 01.2021

30.

Номер опубликования: 0001202101200011
Дата опубликования: 20.01.2021

ФНС изменит форму налоговой декларации по УСН

ФНС подготовила поправки в форму налоговой декларации по УСН. Проект соответствующего приказа опубликован на Едином портале для размещения проектов НПА.

Напомним, действующая форма декларации по УСН утверждена приказом от 26.02.2016 № ММВ-7-3/99@.

Теперь ФНС предлагает изменить в декларации:

раздел 2.1.1 «Расчет налога, уплачиваемого в связи с применением упрощенной системы налогообложения, (объект налогообложения – доходы)»;
раздел 2. 2 «Расчет налога, уплачиваемого в связи с применением упрощенной системы налогообложения, и минимального налога (объект налогообложения — доходы, уменьшенные на величину расходов)».

В указанных разделах появится новая строка «Код налоговой льготы». Она должна заполняться, если за налоговый период налогоплательщиком применялась пониженная или нулевая ставка налога. Данный показатель будет составным:

в первой части показателя надо будет указать код налоговой льготы;
во второй части показателя будет указываться номер или буквенное обозначение соответствующей структурной единицы (статья, часть, пункт, подпункт, абзац, иное) закона субъекта РФ, которым установлена налоговая льгота.

Порядок заполнения декларации по УСН дополняется новыми кодами налоговых льгот, устанавливаемых регионами. В данном случае речь идет о пониженных ставках налога по УСН, которые могут быть установлены законами субъектов РФ в соответствии со статьей 346. 20 НК РФ.

ФНС рассчитывает, что обновленная форма декларации по УСН будет введена с 1 января 2021 года.

В «1С:Предприятии 8» изменения будут поддержаны после утверждения соответствующего приказа ФНС с выходом очередных версий. О сроках см. в «Мониторинге законодательства».

БУХПРОСВЕТ

По общему правилу организации и индивидуальные предприниматели, применяющие УСН, обязаны сдавать налоговые декларации по итогам каждого года (ст. 346.23 НК РФ). Организации сдают декларацию не позднее 31 марта года, следующего за истекшим налоговым периодом. ИП обязаны сдавать декларацию по УСН не позднее 30 апреля года, следующего за истекшим годом.

При прекращении предпринимательской деятельности декларация сдается не позднее 25-го числа месяца, следующего за месяцем, в котором была прекращена деятельность. Если плательщик утрачивает право на применение УСН по причине, например, превышения предельно допустимого дохода, он представляет налоговую декларацию не позднее 25-го числа месяца, следующего за кварталом, в котором было утрачено право на УСН.

Между тем, в связи с распространением в стране коронавирусной инфекции и объявлением режима нерабочего времени, общие сроки представления деклараций по УСН были перенесены на более поздние сроки. Так, в соответствии с постановлением Правительства РФ от 02.04.2020 № 409 срок сдачи декларации по УСН был перенесен на 3 месяца. Организации обязаны ее сдать до 30 июня, а ИП – до 30 июля 2020 года.

ФНС сокращает сроки проведения камеральных проверок деклараций по НДС

15 октября, 2020

ФНС сокращает сроки проведения камеральных проверок деклараций по НДС

ФНС запустила новый пилотный проект по сокращению сроков камеральной проверки деклараций по НДС до одного месяца. Ранее срок проверки был 2 месяца с момента представления декларации. Особенности проведения проверки в сокращенный срок приведены в письме ФНС от 06.10.2020 № ЕД-20-15/129@.

В письме отмечается, что в отношении деклараций по НДС, в которых заявлено право на возмещение сумм налога из бюджета, предусмотренное статьей 176 НК РФ, камеральная проверка может быть завершена по истечении месяца со дня представления декларации.

Днем представления декларации по НДС назначено 25-е число месяца, следующего за истекшим налоговым периодом, либо день представления уточненной декларации по НДС.

Не позднее 10 календарных дней со дня представления декларации по НДС, налоговые органы должны осуществить оценку на соответствие следующим условиям:

представление заявления о применении заявительного порядка возмещения НДС;
сумма уплаченных налогов за три года, предшествующих налоговому периоду, за который представлена налоговая декларация по НДС, превышает сумму налога заявленной к возмещению из бюджета по такой декларации.

По истечении месяца со дня представления декларации, налогоплательщики, соответствующие указанным условиям оцениваются на одновременное соответствие следующим условиям:

отсутствие ошибок в декларации и противоречий между сведениями, содержащимися в представленных документах, либо несоответствия сведений, представленных налогоплательщиком, сведениям, содержащимся в документах, имеющихся у налогового органа, и полученным им в ходе налогового контроля, приводящих к изменению налоговых обязательств;
отсутствие противоречий между сведениями об операциях, содержащихся в декларациях по НДС, представленных налогоплательщиком и его контрагентами;
отсутствие признаков нарушений законодательства о налогах и сборах, приводящих к завышению суммы налога, заявленной к возмещению из бюджета либо к занижению суммы налога, подлежащей уплате в бюджет.

При проведении камеральной проверки оценка целесообразности проведения мероприятий налогового контроля в отношении контрагентов низкого и среднего уровня налогового риска, по которым налогоплательщиком заявлены налоговые вычеты по НДС, определяется с учетом сведений, имеющихся в распоряжении налоговой.

В ФНС уверены, что сокращение срока камеральных проверок по НДС позволит бизнесу эффективнее распоряжаться оборотными капиталами и улучшит деловой климат.

В ФНС рассказали о новых правилах оформления налогового вычета

https://ria.ru/20210423/vychet-1729562382.html

В ФНС рассказали о новых правилах оформления налогового вычета

В ФНС рассказали о новых правилах оформления налогового вычета — РИА Новости, 14.05.2021

В ФНС рассказали о новых правилах оформления налогового вычета

С 21 мая россияне смогут в упрощенном порядке получать налоговый вычет из налога на доходы физлиц (НДФЛ) по расходам на покупку жилья, земли и по индивидуальным РИА Новости, 14. 05.2021

2021-04-23T01:31

2021-05-14T21:08

ндфл

россия

налоги

жилье

федеральная налоговая служба (фнс россии)

экономика

/html/head/meta[@name=’og:title’]/@content

/html/head/meta[@name=’og:description’]/@content

https://cdn21.img.ria.ru/images/07e4/0c/18/1590691426_0:279:3072:2007_1920x0_80_0_0_49e130340831aaa78ce03627eb5ee7a7.jpg

МОСКВА, 23 апр — РИА Новости. С 21 мая россияне смогут в упрощенном порядке получать налоговый вычет из налога на доходы физлиц (НДФЛ) по расходам на покупку жилья, земли и по индивидуальным инвестиционным счетам (ИИС), рассказали «Российской газете» в Федеральной налоговой службе (ФНС).Подчеркивается, что вычет можно будет оформить автоматически, не собирая никаких документов и не посещая налоговую инспекцию. Для этого понадобится заполнить заявление в личном кабинете налогоплательщика на сайте ФНС.В налоговой службе пояснили, что на возможность получения вычета в упрощенном порядке укажет автоматически предзаполненное заявление, сформированное по итогам двадцатидневной проверки полученных от банка сведений. Налогоплательщики получат специальное сообщение об этом в личном кабинете. До появления соответствующего заявления никаких действий не требуется.Чтобы уточнить, можно ли получить налоговый вычет в упрощенном порядке, гражданам советуют обратиться в банк, с которым заключен договор на ведение ИИС или на приобретение имущества.Перечень банков-участников будет актуализироваться в специальном разделе на сайте ФНС, заключили в ведомстве.

https://rsport.ria.ru/20210405/sport-1604324992.html

россия

РИА Новости

[email protected]

7 495 645-6601

ФГУП МИА «Россия сегодня»

https://xn--c1acbl2abdlkab1og.xn--p1ai/awards/

2021

РИА Новости

[email protected]

7 495 645-6601

ФГУП МИА «Россия сегодня»

https://xn--c1acbl2abdlkab1og.xn--p1ai/awards/

Новости

ru-RU

https://ria.ru/docs/about/copyright.html

https://xn--c1acbl2abdlkab1og.xn--p1ai/

РИА Новости

internet-group@rian. ru

7 495 645-6601

ФГУП МИА «Россия сегодня»

https://xn--c1acbl2abdlkab1og.xn--p1ai/awards/

https://cdn23.img.ria.ru/images/07e4/0c/18/1590691426_0:0:2732:2048_1920x0_80_0_0_370e079a86192cece0409502f976cc38.jpg

РИА Новости

[email protected]

7 495 645-6601

ФГУП МИА «Россия сегодня»

https://xn--c1acbl2abdlkab1og.xn--p1ai/awards/

РИА Новости

[email protected]

7 495 645-6601

ФГУП МИА «Россия сегодня»

https://xn--c1acbl2abdlkab1og.xn--p1ai/awards/

ндфл, россия, налоги, жилье, федеральная налоговая служба (фнс россии), экономика

Техподдержка: Инструкция по использованию электронной подписи на сайте Федеральной налоговой службы

Оглавление

Внимание! В соответствии с пунктом 3 статьи 80 и с пунктом 5 статьи 174 Налогового кодекса Российской Федерации налоговые декларации по налогу на добавленную стоимость через сервис ФНС не принимаются. Также, согласно пункту 10 статьи 431 Налогового кодекса Российской Федерации расчеты по страховым взносам через настоящий сервис не принимаются.

Установка Программы «Налогоплательщик ЮЛ»

На сайте ФНС https://www.nalog.ru/rn77/program/5961229/ скачать файл с последней версией программы и запустить установку двойным кликом мыши:

После распаковки и подготовки файлов к установке откроется окно установки программы, в котором необходимо нажать «Далее»:

Прочитать лицензионное соглашение и принять его условия, нажать «Далее»:

Выбрать «Полную» установку и нажать «Далее»:

Если необходимо, можно изменить папку установки программы, нажав «Изменить…».

Далее нажать «Далее»:

Для начала установки нажать «Установить»:

Для завершения установки программы нажать «Готово»:

После успешной установки на рабочем столе появится ярлык «Налогоплательщик ЮЛ». Также в системном меню WINDOWS Пуск – Программы появится подпункт «Налогоплательщик ЮЛ», содержащий ссылки на исполняемую программу и руководство пользователя.

При первом запуске программы после установки версии будет показано окно с описанием версии, далее выполнится конвертация программы, переиндексация, после чего появится запрос на прием отчетных форм. Затем произойдет прием описаний в выбранном варианте. После этого программа будет готова к работе. Работа в программе Налогоплательщик описана в файле «Руководство пользователя.doc» Пуск – Программы – Налогоплательщик ЮЛ – Руководство пользователя.

Формирование транспортного контейнера в программе «Налогоплательщик ЮЛ»

После формирования декларации или загрузки существующей, необходимо ее выгрузить для формирования транспортного контейнера. Для выгрузки документа нужно правым кликом мыши кликнуть на отчет. При этом если помечен документ или группа документов, то будут выгружены помеченные документы. Если нет помеченных документов, то будет выгружен документ, на котором установлен курсор.

В выпадающем меню выбрать «Передача по Интернет».

Откроется список отмеченных для выгрузки документов:

Нажать «ОК».

Откроется окно со служебной информацией:

В нем необходимо заполнить код ИФНС, в которую отправляется отчетность. И подтвердить введенные данные нажатием кнопки «ОК».

Если заполнены все необходимые поля, отчетность будет выгружена.

После нажатия кнопки «ОК» откроется окно формирования транспортного контейнера:

В нем необходимо указать папку, в которой будет размещен файл с транспортным контейнером, идентификатор налогоплательщика, сертификат ключа подписи, которым будет подписан передаваемый файл отчетности и нажать кнопку «Сформировать».

Для подписания отчетности будет запрошен пароль на контейнер:

После ввода пароля и нажатия кнопки «ОК» будет сформирован контейнер:

Получение идентификатора налогоплательщика

Для самостоятельной регистрации налогоплательщиков в системе сдачи налоговой отчетности и получения идентификатора необходимо пройти регистрацию в сервисе: https://service.nalog.ru/reg/Account/Registry:

Для регистрации необходимо ввести Логин, Пароль, Подтверждение пароля и E-mail:

После нажатия кнопки «Зарегистрировать» на электронную почту будет выслано письмо с ссылкой для подтверждения регистрации:

После подтверждения электронной почты и входа в личный кабинет появится сообщение о необходимости зарегистрировать сертификат и получить идентификатор:

После нажатия на кнопку «Зарегистрировать сертификат» откроется форма для загрузки сертификата:

После выбора файла сертификата откроется окно со сведениями об организации, в котором необходимо будет заполнить пустые поля (КПП и Код налогового органа):

Затем нажать кнопку «Передать на регистрацию». Страница обновится и отобразится статус заявки на регистрацию сертификата:

Когда сертификат пройдет регистрацию и будет присвоен идентификатор, на почту (указанную при регистрации) придет сообщение об успешной регистрации и о присвоении идентификатора.

После обновления страницы изменится статус регистрации сертификата, и в данных организации отобразится присвоенный идентификатор:

Для представления отчетности необходимо использовать «Сервис сдачи налоговой и бухгалтерской отчетности».

Представление отчетности в ФНС

Для представления налоговой и бухгалтерской отчетности в электронном виде нужно зайти на страницу: http://nalog.ru/rn77/service/pred_elv/:

Далее необходимо установить Сертификат открытого ключа подписи МИ ФНС России по ЦОД, корневой сертификат ФНС России и список отозванных сертификатов.

Установка открытого ключа ФНС

Для установки сертификата открытого ключа подписи МИ ФНС России по ЦОД нужно его сохранить и запустить установку двойным кликом мыши.

На вкладке «Общие» нажать кнопку «Установить сертификат…»:

Откроется «Мастер импорта сертификатов»:

После нажатия кнопки «Далее» откроется окно выбора хранилища сертификатов.

Необходимо отметить «Автоматически выбрать хранилище на основе типа сертификата», нажать «Далее»:

Для завершения работы «Мастера импорта сертификатов» нажать кнопку «Готово»:

В окне сообщения об успешном импорте сертификата нажать кнопку «ОК»:

Сертификат открытого ключа подписи МИ ФНС России по ЦОД установлен.

Установка корневого сертификата

Для установки корневого сертификата ФНС необходимо перейти по ссылке: http://www.nalog.ru/rn77/about_fts/uc_fns/, скачать корневой сертификат УЦ ФНС России и двойным кликом мыши открыть его, для этого в окне открытия файла нажать кнопку «Открыть»:

На вкладке «Общие» нажать кнопку «Установить сертификат…»:

Откроется «Мастер импорта сертификатов»:

После нажатия кнопки «Далее» откроется окно выбора хранилища сертификатов:

Необходимо выбрать «Поместить все сертификаты в следующее хранилище», нажать кнопку «Обзор» и выбрать хранилище «Доверенные корневые центры сертификации» и нажать «ОК»:

После выбора хранилища сертификатов нажать «Далее»:

Для завершения работы «Мастера импорта сертификатов» нажать кнопку «Готово»:

В окне сообщения об успешном импорте сертификата нажать кнопку «ОК»:

Корневой сертификат установлен.

Установка списка отозванных сертификатов

Для установки списка отзыва нужно сохранить его на компьютер, кликнуть по нему правой кнопкой мыши и выбрать «Установить список отзыва (CRL)». В открывающихся окнах последовательно нажимать «Далее» – «Далее» – «Готово», не меняя настройки по умолчанию.

После установки сертификатов и списка отзыва нажать «Перейти в «Сервис сдачи налоговой и бухгалтерской отчетности».

Ознакомиться с технологией приема и обработки деклараций (расчетов) и перейти к проверке условий, нажав «Проверить выполнение условий»:

Убедиться, что все условия выполнены, и нажать «Выполнить проверки»:

На четвертом шаге проверки будет предложение выбрать цифровой сертификат.

После выбора необходимого сертификата нажать «ОК»:

После проверки сертификата ключа подписи нажать «Начать работу с сервисом»:

В открывшемся окне:

Нужно заполнить пустые поля (Код абонента, КПП) и нажать «Сохранить»:

После сохранения введенных данных перейти в раздел «Загрузка файла»:

Нажать «Обзор» и выбрать контейнер, подготовленный с помощью программы «Налогоплательщик ЮЛ».

После выбора файла нажать кнопку «Отправить».

После передачи файла произойдет автоматический переход на страницу проверки статуса обработки:

После завершения документооборота состояние изменится на «Завершено»:

Посмотреть отправленный файл и историю документооборота можно, перейдя по ссылке в графе «Состояние» – «Завершено (успешно)»:

В «Истории документооборота» можно посмотреть или скачать все регламентные документы.

В дальнейшем можно в любое время зайти в данный сервис (https://service.nalog.ru/nbo/) и просмотреть отправленные ранее декларации (расчеты).

Нарушение регуляции ответа интерферона I типа при COVID-19

Инфекция SARS-CoV-2 может привести к чрезмерной выработке провоспалительных цитокинов, но, как сообщается, производство интерферонов типа I, которые являются ключевыми противовирусными медиаторами, снижено. Здесь мы обсуждаем, как несбалансированные ответы интерферона могут способствовать патологии COVID-19.

COVID-19 характеризуется респираторным заболеванием от легкой до тяжелой степени, которое, по-видимому, зависит от возраста и сопутствующих заболеваний.У тяжелобольных пациентов часто развивается острый респираторный дистресс-синдром (ОРДС) или полиорганные поражения в результате вторичного гемофагоцитарного лимфогистиоцитоза (sHLH). И ARDS, и sHLH характеризуются чрезмерным продуцированием цитокинов и чрезмерным воспалением, что является признаком синдрома высвобождения цитокинов (CRS). CRS, вызванный SARS-CoV-2, напоминает иммунную дисрегуляцию, вызванную другими высокопатогенными респираторными вирусами, включая родственные бета-коронавирусы SARS-CoV и MERS-CoV.Заметно повышенные уровни провоспалительных цитокинов в плазме, включая IL-6 и фактор некроза опухоли (TNF), а также некоторых хемокинов были обнаружены у пациентов с COVID-19 (ref. ¹).

Инфекции SARS-CoV-2, передающиеся воздушно-капельным путем, у людей возникают в результате проникновения вируса в эпителиальные клетки носовых и дыхательных путей через связывание с ангиотензин-превращающим ферментом 2 (ACE2). TMPRSS2, клеточная протеаза, которая активирует спайковый белок SARS-CoV-2, колокализуется с ACE2 и может инициировать слияние SARS-CoV-2 непосредственно на плазматической мембране.В легких SARS-CoV-2 поражает альвеолярные эпителиальные клетки I и II типа, а также альвеолярные макрофаги, которые являются одними из первых продуцентов провоспалительных цитокинов. В качестве ключевых компонентов немедленного противовирусного ответа интерфероны типа I (далее именуемые IFN) имеют решающее значение для ограничения репликации и распространения вируса посредством аутокринной и паракринной передачи сигналов рецептора IFN типа I (IFNAR). Однако минимальные количества IFN были обнаружены в периферической крови или легких пациентов с тяжелой формой COVID-19 (ссылки ^1,2), что контрастирует с тем, что наблюдается у пациентов, инфицированных высокопатогенными вирусами гриппа.Интересно, что хотя низкие уровни системной продукции IFN, по-видимому, коррелируют с тяжелым COVID-19 (ссылка ²), локальная индукция IFN и IFN-стимулированных генов (ISG) была заметна в бронхоальвеолярном лаваже (БАЛ) некоторых тяжелобольные ³. Это было связано с активацией специализированных иммунных клеток, таких как резидентные дендритные клетки (ДК) в легких. В частности, было показано, что плазмацитоидные DC продуцируют IFNα в ответ на SARS-CoV. У пациентов с SARS, которые не получали кортикостероиды, IFNα был обнаружен в плазме во время «предкризисной» фазы, но снизился во время «кризисной» фазы ⁴.В мышиной модели инфекции SARS-CoV локальные ответы IFN в легких были задержаны относительно пика вирусной репликации, что препятствовало выведению вируса и было связано с развитием CRS ⁵. Кинетика системного и местного ответа на IFN, которые возникают во время COVID-19, еще предстоит полностью выяснить, а также их соответствующий вклад в патогенез COVID-19 и тяжесть заболевания.

Нарушение регуляции ответов IFN свидетельствует об эффективных иммуномодулирующих стратегиях, используемых бета-коронавирусами.Во время фазы инкубации SARS-CoV-2 незаметно реплицируется в клетках-хозяевах, не вызывая детектируемого запуска IFN, что приводит к высокой вирусной нагрузке ¹. Известно, что коронавирусы индуцируют образование мембранных компартментов, предназначенных для синтеза вирусной РНК, и тем самым скрывают молекулярные паттерны, связанные с вирусными патогенами (PAMP; например, вирусные РНК), от обнаружения рецепторами распознавания паттернов хозяина (PRR), такими как RIG-I и MDA5. Кроме того, известно, что некоторые консервативные белки бета-коронавируса, преимущественно неструктурные белки (nsps), обладают прямой антагонистической активностью в отношении IFN.Некоторые модифицируют специфические особенности вирусной РНК (катализируя метилирование гуанозина-N7 и рибозы-2ʹ- O ), чтобы избежать распознавания специфическими PRR (например, nsp14 и nsp16), в то время как другие, такие как nsp3 и nsp1, ингибируют передача сигнала, опосредованная PRR и IFNAR, соответственно ⁵. Напротив, было показано, что нуклеокапсидный белок SARS-CoV напрямую активирует NF-κB. Устойчивое производство провоспалительных цитокинов и хемокинов с ограниченным образованием IFN во время инфекции SARS-CoV-2 предполагает эффективную активацию NF-κB, но не активацию IFN-регуляторного фактора 3 (IRF3) и IRF7 (см.¹). Будет важно точно определить, как SARS-CoV-2 противодействует индукции IFN и передаче сигналов IFNAR.

В качестве центрального связующего звена между врожденной и адаптивной иммунной системами IFNs необходимы для регулирования активации и функций различных популяций иммунных клеток. Важно отметить, что во время инфекции SARS-CoV или MERS-CoV у мышей IFN напрямую регулируют легочную инфильтрацию макрофагов, происходящих из моноцитов. В то время как блокирование передачи сигналов IFNAR заметно снижает инфильтрацию макрофагов, отсроченная индукция IFN с помощью SARS-CoV приводит к накоплению высокоактивированных макрофагов в легких, что вызывает иммунопатологию ⁵.Напротив, ингибирование IFNAR усиливало рекрутирование нейтрофилов в легкие у мышей, инфицированных MERS-CoV, что приводило к повышенной продукции провоспалительных цитокинов ⁶. Нарушение выработки IFN во время тяжелой формы COVID-19 также может привести к дисбалансу провоспалительных и про-репаративных функций макрофагов дыхательных путей. У пациентов, умерших от SARS-CoV, наблюдалось накопление провоспалительных макрофагов, но дефицит макрофагов для заживления ран в легких; это было связано с более высокими уровнями нейтрализующих антител в сыворотке против спайкового белка SARS-CoV ⁷.Другие клетки врожденного иммунитета, такие как естественные клетки-киллеры (NK), также регулируются IFN во время коронавирусной инфекции. Ингибирование передачи сигналов IFNAR подавляло накопление NK-клеток в легких мышей ⁶, инфицированных MERS-CoV, что может замедлить ранний клиренс инфицированных вирусом клеток. В то время как пациенты с тяжелой формой COVID-19 демонстрировали глубокое истощение и функциональное истощение NK-клеток ⁸, неясно, связана ли эта дисфункция NK-клеток с нарушением регуляции ответов IFN.

Тяжелая форма COVID-19 связана с нарушением Т-клеточного ответа, которое проявляется в лимфопении и функциональном истощении CD4 ⁺ и CD8 ⁺ Т-клеток ⁸. Нарушение ответа Т-клеток может быть результатом недостаточной продукции ИФН, поскольку ИФН способствуют выживанию и эффекторным функциям Т-клеток. Блокирование передачи сигналов IFNAR во время инфекции БВРС-КоВ ослабляло развитие вирус-специфичных CD4 ⁺ и CD8 ⁺ Т-клеток у мышей ⁶.Хотя ранняя продукция IFN имеет решающее значение для эффективного ответа Т-клеток, отсроченный ответ IFN может подавлять пролиферацию Т-клеток или выход Т-клеток из лимфоидных органов или может вызывать функциональное истощение и гибель Т-клеток. Поражение легких, связанное с СВК, у пациентов с тяжелой формой COVID-19 указывает на возможную неспособность своевременно активировать иммуносупрессивные механизмы. Действительно, было показано, что количество регуляторных Т-клеток (T _reg) у пациентов с COVID-19 обратно коррелирует с тяжестью заболевания ⁹.Известно, что IFN являются ключевыми регуляторами развития клеток T _reg. Таким образом, возникает соблазн предположить, что недостаточный или нерегулируемый ответ IFN, вызванный инфекцией SARS-CoV-2, может влиять на генерацию клеток T _reg во время фазы восстановления COVID-19. В будущих исследованиях следует изучить, как нарушение регуляции IFN во время COVID-19 может формировать Т-клеточные ответы, и, учитывая, что активация Т-клеток CD4 ⁺ имеет решающее значение для развития В-клеточного иммунитета, как это, в свою очередь, может повлиять на ответы антител.

То, что нарушение регуляции IFN представляет собой ключевой детерминант патогенеза COVID-19, подчеркивает его потенциал для терапевтического вмешательства. Профилактическое введение IFN, которое вызывает ранее существовавшее противовирусное состояние в клетках-мишенях, может блокировать вирусную инфекцию на самой ранней стадии. Было показано, что ежедневные назальные капли с IFNα вместе со стандартными средствами индивидуальной защиты (СИЗ) защищают медицинских работников из группы риска от COVID-19 в течение 28 дней без заметных побочных эффектов (NCT04320238).Использование интерферонов для лечения COVID-19 остается спорным, особенно в отношении сроков приема. Раннее лечение IFN до пика вирусной репликации защищало мышей от смертельного заражения SARS-CoV или MERS-CoV, тогда как позднее введение IFN затрудняло клиренс вируса и усугубляло иммунопатологию ^5,6. Клинические исследования SARS-CoV и MERS-CoV также показали неубедительные эффекты IFN в сочетании с противовирусными препаратами на исходы заболевания, что, вероятно, связано с разным временем приема, а также сопутствующими заболеваниями.Важно отметить, что ACE2 был недавно идентифицирован как ISG в эпителиальных клетках дыхательных путей человека ¹⁰. Может ли профилактическое или терапевтическое введение IFN усилить проникновение и репликацию SARS-CoV-2 в клетках-мишенях во время прогрессирования заболевания, является потенциальной проблемой безопасности. Дальнейшие исследования должны также определить вклад генетики хозяина, возраста и сопутствующих заболеваний в терапевтическую эффективность интерферонов. В то время как несколько текущих клинических испытаний оценивают эффективность лечения IFN для COVID-19, более глубокое понимание пространственно-временной кинетики ответов IFN во время клинических инфекций SARS-CoV-2 необходимо для получения информации о терапии, связанной с IFN, и разработке вакцины.

Ссылки

1.
Blanco-Melo, D. et al. Несбалансированная реакция хозяина на SARS-CoV-2 способствует развитию COVID-19. Ячейка https://doi.org/10.1016/j.cell.2020.04.026 (2020).
Артикул PubMed PubMed Central Google Scholar
2.
Hadjadj, J. et al. Нарушение активности интерферона I типа и обострение воспалительных реакций у пациентов с тяжелым Covid-19.Препринт на medRxiv https://doi.org/10.1101/2020.04.19.20068015 (2020).
Артикул Google Scholar
3.
Zhou, Z. et al. Повышенный врожденный иммунный ответ в дыхательных путях у пациентов с COVID-19. Cell Host Microbe https://doi.org/10.1016/j.chom.2020.04.017 (2020).
Артикул PubMed PubMed Central Google Scholar
4.
Cameron, M. J. et al. Опосредованные интерфероном иммунопатологические явления связаны с атипичными врожденными и адаптивными иммунными ответами у пациентов с тяжелым острым респираторным синдромом. J. Virol. 81 , 8692–8706 (2007).
CAS Статья Google Scholar
5.
Channappanavar, R. et al. Нарушение регуляции интерферона I типа и воспалительные реакции моноцитов-макрофагов вызывают летальную пневмонию у мышей, инфицированных SARS-CoV. Клеточный микроб-хозяин 19 , 181–193 (2016).
CAS Статья Google Scholar
6.
Channappanavar, R. et al. Время ответа IFN-I относительно репликации вируса определяет исходы заражения коронавирусом MERS. J. Clin. Вкладывать деньги. 130 , 3625–3639 (2019).
Артикул Google Scholar
7.
Liu, L. et al.IgG к спайку вызывает тяжелое острое повреждение легких, искажая ответы макрофагов во время острой инфекции SARS-CoV. JCI Insight 4 , e123158 (2019).
Артикул Google Scholar
8.
Zheng, M. et al. Функциональное истощение противовирусных лимфоцитов у пациентов с COVID-19. Cell Mol. Иммунол. 17 , 533–535 (2020).
CAS Статья Google Scholar
9.
Qin, C. et al. Нарушение регуляции иммунного ответа у пациентов с коронавирусом 2019 (COVID-19) в Ухане, Китай. Clin. Заразить. Дис. https://doi.org/10.1093/cid/ciaa248 (2020).
Артикул PubMed PubMed Central Google Scholar
10.
Ziegler, C.G.K. et al. Рецептор SARS-CoV-2 ACE2 представляет собой стимулируемый интерфероном ген в эпителиальных клетках дыхательных путей человека и обнаруживается в определенных подмножествах клеток в тканях. Ячейка https://doi.org/10.1016/j.cell.2020.04.035 (2020).
Артикул PubMed PubMed Central Google Scholar

Скачать ссылки

Информация об авторе

Принадлежности

Департамент микробиологии, Чикагский университет, Чикаго, Иллинойс, США
Дхирадж Ачарья, ГуанКун Лю и Микаэла У. Гэк

9 Вклады2 Авторы одинаково внесли свой вклад во все аспекты статьи.

Автор, ответственный за переписку

Микаэла У. Гак.

Декларации этики

Конкурирующие интересы

Авторы заявляют об отсутствии конкурирующих интересов.

Дополнительная информация

Ссылки по теме

ClinicalTrials.gov: https://clinicaltrials.gov/

Об этой статье

Цитируйте эту статью

Acharya, D., Лю Дж. И Гак М.У. Нарушение регуляции ответа интерферона I типа при COVID-19. Nat Rev Immunol 20, 397–398 (2020). https://doi.org/10.1038/s41577-020-0346-x

Скачать цитату

Дополнительная литература

Взаимодействие между воспалительными путями и COVID-19: критический обзор патогенеза и терапевтических возможностей
- Шалки Чоудхари
- , Каджал Шарма
- и Ом Силакари
Микробный патогенез (2021 год)
Прототип QSP-модели иммунного ответа на SARS ‐ CoV ‐ 2 для развития сообщества
- Вэй Дай
- , Рохит Рао
- , Анна Шер
- , Несси Таня
- , Синтия Дж.Мусанте
- и Ричард Аллен
CPT: Фармакометрия и системная фармакология (2021 год)
Синдром острого респираторного дистресс-синдрома и COVID-19 у ребенка с системной красной волчанкой
- Симоне Сухдео
- , Эмили Негропонте
- , Харипрем Раджасекхар
- , Сунанда Гаур
- , Даниэль Б. Хортон
- , Амиша Малхотра
- и Л. Нандини Мурти
Волчанка (2021 год)
Почему COVID-19 более серьезен у пациентов с диабетом? Роль ангиотензин-превращающего фермента 2, эндотелиальной дисфункции и иммуновоспалительной системы
- Джейкоб Робертс
- , Антония Л.Причард
- , Эндрю Т. Тревик
- , Адриано Г. Росси
- , Николь Брейс
- , Пол Кэхилл
- , Сандра М. Макрури
- , Джун Вей
- и Ян Л. Мегсон
Границы сердечно-сосудистой медицины (2021 год)
Клиническое и научное обоснование больничного протокола лечения COVID-19 «MATH +»
- Пьер Кори
- , Г.Умберто Медури
- , Хосе Иглесиас
- , Джозеф Варон
- и Пол Э. Марик
Журнал интенсивной терапии (2021 год)

Интерферон-бета предлагает многообещающие возможности лечения COVID-19: систематический обзор и метаанализ клинических исследований

Путем поиска в 4 базах данных мы обнаружили 356 записей. Полученные записи были оценены на предмет дублирования, а заголовки и аннотации были проанализированы в соответствии с критериями включения.Из 356 записей 12 РКИ и когортных исследований были отобраны для полнотекстового скрининга. Наконец, 5 записей были включены в систематический обзор, а 3 статьи — в метаанализ.

Всего участников было 314 пациентов. На блок-схеме PRISMA показаны включенные исследования (рис. 1). После полнотекстового скрининга было исключено 7 записей (альфа-интерферон = 5, дизайн исследования (протокол) = 1, ретроспективное исследование = 1).

Рис. 1

Базовые символы

В таблице 1 показаны детали включенных исследований.Мужчины были основными участниками всех исследований. Доля пациентов мужского пола колебалась от 54,0% до 75,0% (медиана 60,0%). Средний возраст участников в большинстве исследований был выше 55 лет.

Таблица 1 Включены клинические исследования и исходные характеристики среди пациентов с COVID-19, получавших IFN-β

Клинические симптомы

Во всех статьях были исследованы госпитализированные пациенты с COVID-19 от легкой до тяжелой степени. В группе вмешательства доля госпитализаций в отделения интенсивной терапии (ОИТ) была ниже, чем в контрольных группах.В исследовании Monfared et al. из Ирана доля госпитализированных в ОИТ составила 45,23% и 58,97% в группах вмешательства и контрольной группе соответственно (Davoudi-Monfared et al. 2020). Кроме того, о таком же результате сообщили Rahmani et al. в исследовании РКИ по количеству госпитализированных в ОИТ (42,42% против 66,66%) (Rahmani et al.2020). Аналогичным образом, в РКИ, проведенном в Гонконге, Fan-Ngai Hung et al. сообщили, что время (в днях) раннего предупреждения с оценкой 0 (согласно национальной шкале раннего предупреждения 2) составило 4.0 и 8,0 дней для интервенционной и контрольной групп соответственно. Они продемонстрировали, что существует значимая взаимосвязь между вмешательством INF-β и снижением количества госпитализаций в ОИТ и нулевым показателем времени раннего предупреждения. Более того, лечение комбинацией противовирусных препаратов значительно снизило уровни IL-6, в то время как оно не показало какого-либо значительного влияния на концентрации TNFα и IL-10 (Hung et al., 2020) (Таблица 2).

Таблица 2 Исход и клинические показатели среди пациентов с COVID-19, получавших IFN-β

У всех пациентов во всех включенных исследованиях при поступлении наблюдалась лихорадка.В группе вмешательства у большинства участников лихорадка исчезла в конце периода исследования. В большинстве исследований количество лейкоцитов и лимфоцитов было увеличено в экспериментальной группе. Исследование Dastan et al. продемонстрировали, что лихорадка у всех пациентов исчезла в течение первых семи дней. Аналогичным образом, лихорадка исчезла у 81% и 78% пациентов в группе вмешательства и в контрольной группе соответственно. Более того, сравнение КТ легких и рентгенографии грудной клетки при поступлении и на 14-й день показало непрозрачность матового стекла у 16 пациентов и двустороннюю инфильтрацию у 14 пациентов, что продемонстрировало наступление выздоровления через 14 дней (Dastan et al.2020).

Время появления симптомов от начала лечения составляло от 5 до 10 дней. О самом коротком времени введения IFN после появления симптомов сообщил Гонконг. Это исследование не показало смертности в конце исследования. О самом продолжительном времени от появления симптомов до введения интерферона сообщили Monfared et al. в Иране; в конце этого исследования показатели смертности в группах вмешательства и контроля составили 19% и 43,6% соответственно (Davoudi-Monfared et al.2020).

Вмешательство (доза IFN-β)

В большинстве исследований 44 мкг / мл (12 миллионов МЕ / мл) INF-β вводили три раза в неделю в течение двух недель подряд или до выписки. Во всех исследованиях INF-β вводили подкожно. Более того, в большинстве исследований не сообщалось о серьезных побочных эффектах терапии интерфероном среди групп вмешательства. Только в многоцентровом РКИ, проведенном в Гонконге, исследователи сообщили о 2% побочных эффектах терапии интерфероном; однако они в основном были легкими и самоограничивающимися (Hung et al.2020).

Исходы

Мы обнаружили, что показатели исходов (выписка и уровень смертности) были снижены во всех исследованиях в группе вмешательства. Среднее количество дней госпитализации в обеих исследуемых группах колебалось от 6,75 до 16,8 дней; однако средняя продолжительность госпитализации в группах вмешательства (9 дней) была ниже, чем в контрольных группах (12,25 дня).

Что касается уровня смертности, Rahmani et al. сообщили, что смертность и выписки составили 6,06% против 18,18% и 78,79% против 54.55% в группах IFN по сравнению с контрольной группой, соответственно (Rahmani et al.2020). В другом исследовании (Dastan et al.) Не было контрольной группы для сравнения результатов. Аналогичным образом, в одном исследовании во время исследования в группах вмешательства и контрольной группе не было летальных исходов.

Однако средний уровень смертности в группе INF-β и стандартной группе составил 6,195% и 18,02% соответственно.

В многоцентровом РКИ Fan-Ngai Hung et al. в Гонконге среднее количество дней госпитализации в экспериментальной и контрольной группах составило 9.0 и 14,5 суток соответственно. Кроме того, в конце исследования они не сообщили о смерти в экспериментальной и контрольной группах (Hung et al., 2020). В рандомизированном контролируемом исследовании, проведенном в Иране, уровень смертности в экспериментальной и контрольной группах составил 19% и 43,6% в течение 28 дней периода исследования. Напротив, в этом исследовании сообщается, что продолжительность госпитализации в группе вмешательства была больше, чем в контрольной группе (14,80 ± 8,45 против 12,25 ± 7,48) (Davoudi-Monfared et al.2020). В другом открытом клиническом исследовании с участием одной группы сообщалось только об одной смерти после 45 дней госпитализации (Payandemehr et al.2020). В другом неконтролируемом исследовании лихорадка исчезла у всех пациентов в течение первых 7 дней (Dastan et al., 2020).

Мета-анализ

Из четырех включенных исследований три исследования имели размер эффекта (HR и OR) для вероятности выписки для сравнения терапевтических эффектов INF-β среди исследуемых групп (группа стандартной помощи и группа INF-β). Только в одном исследовании сообщалось о степени воздействия на уровень смертности. Поэтому мы провели метаанализ для оценки распространенности выписанных пациентов среди трех исследований.Во всех исследованиях частота выписки была достоверно связана с терапией INF-β. Согласно метаанализу, значительная разница была обнаружена между группами вмешательства и контрольной группой по общей скорости выпадения (ОР = 3,05; 95% ДИ, (1,09–5,01). Не было значительной гетерогенности ( P = 0,46) (рис. 2).

Рис. 2

Эффекты терапии интерфероном β-1 у пациентов с COVID-19

Frontiers | Функциональное истощение выработки интерферонов типа I и II у пациентов с тяжелой формой COVID-19

Введение

В начале декабря 2019 г. первые случаи вирусной пневмонии неизвестного происхождения были выявлены в Ухане, столице провинции Хубэй в Китае (1, 2).Вирус был идентифицирован как новый бета-коронавирус, который теперь называется коронавирусом 2 тяжелого острого респираторного синдрома (SARS-CoV-2) из того же семейства, что и SARS-CoV, ответственный за вспышку атипичной пневмонии в 2003 году. Этот коронавирус, вызывающий новое коронавирусное заболевание. (COVID-19) с тех пор распространился по миру и вызвал пандемию (3, 4).

Общие симптомы у пациентов с COVID-19 включают лихорадку, сухой кашель, аносмию, одышку и другие симптомы гриппа (3–5). Несмотря на то, что у большинства пациентов могут оставаться полностью бессимптомные симптомы или могут проявляться только легкие симптомы, у 10–20% пациентов развивается тяжелое заболевание, характеризующееся тяжелой пневмонией, острым респираторным дистресс-синдромом и полиорганной недостаточностью, требующей немедленной госпитализации в отделения интенсивной терапии и часто приводит к летальному исходу (3, 6, 7).Тяжелые клинические симптомы, такие как диффузное поражение альвеол, тромбоз, гемофагоцитоз и истощение иммунных клеток, были описаны в подгруппе пациентов с тяжелой формой COVID-19 (8). Пациенты, страдающие диабетом, раком или другими хроническими заболеваниями, наиболее подвержены риску развития тяжелой формы (9).

Чтобы лучше разделить пациентов, которые могут подвергаться риску осложнений, многочисленные исследования выявили биологические маркеры с худшим прогнозом, такие как лимфопения, и воспалительные маркеры, такие как C-реактивный белок (CRP), лактатдегидрогеназа (LDH) и уровни цитокинов (3). , 10–15).

Несколько авторов исследовали роль различных цитокинов у пациентов с COVID-19. В рамках иммунологического ответа на инфекцию SARS-CoV-2 пациенты часто проявляют агрессивный и неконтролируемый воспалительный ответ с секрецией большого количества провоспалительных цитокинов, таких как интерлейкин (IL) 6, IL10 и фактор некроза опухоли α. (TNFα) в событии, известном как цитокиновый шторм (3, 16–22). Цитокиновый шторм напрямую коррелирует с повреждением легких, полиорганной недостаточностью и неблагоприятным прогнозом (19).

Взаимодействие между врожденным и адаптивным иммунным ответом, по-видимому, имеет решающее значение для определения эволюции пациента, характеризующейся дисбалансом про- и противовоспалительных цитокинов и последующим нарушением регуляции иммунного ответа пациента (23). Интерфероны (IFN) действуют как ключевое звено между врожденным и адаптивным иммунным ответом. IFN типа I (IFN-α / β) секретируются плазматическими дендритными клетками (pDC), в то время как IFN типа II (IFN-γ) преимущественно продуцируются естественными клетками-киллерами и в меньшей степени Т-клетками и макрофагами (24–26) .ИФН типа I и типа II обладают множеством противовирусных эффектов, таких как индукция апоптоза инфицированных клеток и активация макрофагов, естественных киллеров (NK) и Т-лимфоцитов (24–26). Несколько исследований показали нарушение регуляции выработки интерферонов у пациентов с COVID-19 (14, 27, 28).

В поисках новых и мощных биомаркеров неблагоприятного исхода у пациентов с COVID-19 мы проанализировали возможности ответа иммунной системы с помощью in vitro, стимуляции как клеток адаптивного, так и врожденного иммунитета, таким образом эффективно имитируя вирусную инфекцию.Действительно, ранее было показано, что стимуляция in vitro и клеток врожденного и адаптивного иммунитета позволяет прогнозировать худший исход при других заболеваниях, связанных с иммунитетом (29, 30), но, насколько нам известно, еще не исследовалась у пациентов с COVID-19. В этом проспективном одноцентровом исследовании мы сравнили функцию клеток врожденного и адаптивного иммунитета у пациентов с COVID-19 с легкой, умеренной или тяжелой формой заболевания, чтобы подчеркнуть механизм, ответственный за нарушение регуляции иммунного ответа.

Материалы и методы

Дизайн исследования и популяция

Мы провели проспективное когортное исследование в университетской больнице Ниццы. Критериями включения были: (1) все взрослые пациенты, поступившие по поводу COVID-19 в консультационное отделение (отделение дерматологии или инфекционных заболеваний), в отделения инфекционных болезней или в отделение интенсивной терапии университетской больницы Ниццы с марта по апрель 2020 года; (2) отсутствие иммуносупрессивной терапии в течение 6 месяцев до включения; (3) возможность подписать информированное согласие.Критерии исключения: (1) все пациенты до 18 лет; (2) пациенты, находящиеся под стражей, в тюрьме или страдающие психическим заболеванием; (3) беременные или кормящие грудью; (4) с известным иммунодефицитом или получавшим ранее иммуносупрессивную терапию. Было также набрано 50 здоровых доноров, не инфицированных SARS-CoV-2 (подтверждено отрицательным серологическим тестом).

В зависимости от тяжести заражения SARS-CoV-2 пациенты были разделены на три группы: (а) пациенты с тяжелой формой COVID-19 — госпитализированные или переведенные в отделение интенсивной терапии с респираторным дистресс-синдромом или дыхательной недостаточностью. требующие искусственной вентиляции легких или полиорганной недостаточности; (b) пациенты с COVID-19 средней тяжести — это пациенты, госпитализированные в отделения инфекционных болезней, в зависимости от клинических симптомов, связанных с одышкой, и радиологических данных о пневмонии при КТ грудной клетки; (c) Пациенты с COVID-19 с легкими симптомами COVID, такими как обморожение пальцев рук и ног или гриппоподобные симптомы, не требующие наблюдения в больнице.Все пациенты имели симптоматику COVID-19 в соответствии с классификацией ВОЗ с помощью компьютерной томографии, характерной для COVID-19 (31) или обморожения (32), или двух последовательных положительных результатов ОТ-ПЦР-теста на SARS-CoV-2 на образцах из верхних и нижних дыхательных путей. (мазок из носоглотки или инвазивный респираторный образец) или положительный серологический тест (Euroimmun® ELISA).

Эпидемиологические, биологические и клинические данные на день 0 (D0) представлены в таблице 1 и дополнительной таблице 1. Лечение (а), полученное после D0, обобщено в дополнительной таблице 2.Осложнения определялись как все нежелательные явления, такие как госпитализация в отделение интенсивной терапии после ухудшения симптомов, искусственная вентиляция легких, тромбоз глубоких вен, вторичная бактериальная инфекция, почечная недостаточность, гепатит, сердечная недостаточность и смерть.

Таблица 1 . Демографические и исходные характеристики здоровых доноров и пациентов с COVID-19.

Информированное согласие было получено для всех пациентов. Протокол исследования соответствовал этическим принципам Хельсинкской декларации 1975 года и был одобрен соответствующим институциональным комитетом по обзору (NCT04355351).

Сбор крови и анализ цитокинов

Образцы крови были собраны в D0 и в несколько контрольных точек в срок до 2 месяцев после поступления в больницу. Один миллилитр цельной крови стимулировали иммунными лигандами (анти-CD3 в качестве стимулятора Т-клеток и R848 в качестве агониста Toll-подобных рецепторов 7/8 (TLR 7/8)) на отдельных лиофилизированных сферах (LyoSphere ^TM, Qiagen) в течение 8 ч после сбора крови. Образцы стимулированной крови инкубировали в течение 16–24 ч при 37 ° C, а затем центрифугировали при 2000–3000 × g в течение 15 мин для сбора стимулированной сыворотки.Нестимулированные сыворотка и плазма, а также стимулированная сыворотка хранили при -20 ° C до минимизации циклов анализа и замораживания-оттаивания для сохранения качества образцов. Уровни цитокинов в сыворотке и плазме крови с неспецифической стимуляцией или без нее измеряли с помощью теста QuantiFERON-Monitor для обнаружения IFN-γ или специально разработанных картриджей Ella (ProteinSimple) для обнаружения IL-1β, IL-6, IL-8, IL-10, IL-17A, TNF-α и IFN-α в соответствии с инструкциями производителя.

Исследования

in vitro

Для 18 пациентов с COVID-19 один миллилитр цельной крови, взятой в D0, был предварительно обработан различными молекулами в течение 6 часов при 37 ° C с последующей стимуляцией иммунными лигандами на отдельных лиофилизированных сферах (LyoSphere ^TM, Qiagen), как описано в разделе «Сбор крови и анализ цитокинов».Использовались молекулы, которые обычно вводили пациентам с COVID-19 (33–43): гидроксихлорохин (100 мкМ, Inresa), тоцилизумаб против IL6 (100 мкг / мл, RoActemra, Roche), метилпреднизолон (20 мкг / мл, Mylan). , адалимумаб против TNFα (10 мкг / мл, Humira, AbbVie), рекомбинантный человеческий IL-2 (6 нг / мл, Sigma), рекомбинантный человеческий IFN-альфа (100 нг / мл, Sigma) и ниволумаб (1 мкг / мл , Opdivo, Bristol Myers Squibb).

Статистика

Для описательной статистики данные представлены в виде среднего и стандартного отклонения для непрерывных значений с гауссовым распределением, в виде медианы и диапазона для непрерывных значений с негауссовым распределением, а также в виде количества и процентов для категориальных переменных.Тест нормальности Д’Агостино и Пирсона использовался для определения того, имеет ли переменная гауссово распределение или нет. Группы непрерывных значений сравнивали с помощью теста Манна-Уитни, однофакторного дисперсионного анализа ANOVA (> 2 групп) или теста Краскела-Уоллиса (> 2 групп). Множественные сравнительные тесты были выполнены с тестом Краскела-Уоллиса с использованием апостериорного теста Данна . Категориальные переменные сравнивались с использованием критерия хи-квадрат. Кривая AUC (площадь под кривой) ROC (рабочая характеристика приемника) использовалась для определения порога IFN-γ, который наилучшим образом определяет пациентов с осложнениями или без них.Для сравнения данных о выживаемости использовался лог-ранговый тест. Для сравнения двух измерений непрерывной переменной, выполненных на одних и тех же испытуемых (парные данные), использовался знаковый ранговый критерий Уилкоксона. Логистическая регрессия была проведена для определения отношений ODDS и 95% доверительных интервалов (ДИ). В многомерной модели мы скорректировали возраст, пол и ИМТ.

Статистический анализ выполняли с использованием GraphPad Prism 7.0 (GraphPad Software, Inc., Сан-Диего, Калифорния) или SAS 9.4. Все сравнения были двусторонними, и различия считались значимыми, когда значение P <0.05.

Результаты

Когорта исследования

Всего 101 пациент с симптоматикой инфекции COVID-19 (таблица 1) был включен и разделен на три группы в зависимости от тяжести их симптомов на легкие ( n = 41), умеренные ( n = 30). и тяжелые случаи ( n = 30), как описано в Методах. Также было привлечено 50 здоровых доноров. Как описано ранее (1, 3, 4), наблюдалась значительная разница в возрасте, поле, ИМТ и количестве сопутствующих заболеваний среди трех групп пациентов ( p <0.0001, p = 0,0002, p = 0,0003 и p = 0,0018 соответственно). Наиболее частые симптомы инфекции COVID-19 включали кашель, одышку и лихорадку у 52, 52 и 42% пациентов соответственно (дополнительная таблица 1).

Уровни цитокинов в нестимулированной плазме

Как и ожидалось, более высокие уровни провоспалительных цитокинов IL1β, IL6, IL8 и TNFα в плазме крови при поступлении и до специального лечения положительно коррелировали с тяжестью симптомов COVID-19 ( p <0.0001 для всех цитокинов) (таблица 2), что подтверждает результаты предыдущих исследований (3, 16–18).

Таблица 2 . Исходные уровни нестимулированных цитокинов в плазме здоровых доноров и пациентов с COVID-19.

Уровни цитокинов в сыворотке крови после

in vitro Неспецифическая стимуляция клеток врожденного и адаптивного иммунитета

Хотя текущее состояние воспалительного ответа на инфекцию SARS-CoV-2, о чем свидетельствуют уровни цитокинов в плазме, отражает продолжающееся взаимодействие между врожденным и адаптивным иммунитетом, оно мало что говорит нам об иммунной функции.С этой целью мы стимулировали врожденные клетки и Т-лимфоциты пациентов с COVID-19 при поступлении и перед специфическим лечением агонистом Toll-подобного рецептора 7/8 (TLR 7/8) и анти-CD3, соответственно, и измеряли секретируемые цитокины. . TLR7 преимущественно экспрессируется в плазматических дендритных клетках (pDC) (44), а TLR8 сильнее экспрессируется в миелоидных дендритных клетках, моноцитах и в меньшей степени в pDC (45). Цитокин Th27 IL17A, а также IFN типов I и II не обнаруживались в нестимулированной плазме пациентов с COVID-19 (таблица 2).Однако после стимуляции in vitro иммунных клеток между пациентами с разной степенью тяжести COVID-19 возникли значительные различия в уровнях цитокинов (таблица 3, рисунок 1), что отражает работоспособность их иммунной системы. Что касается врожденного иммунитета, то ДК и NK-клетки умеренных и тяжелых пациентов были функционально истощены, о чем свидетельствуют более низкие уровни IFNα (и IFNγ из NK-клеток) после стимуляции in vitro ( p <0,0001) (Рисунок 1A), поскольку ранее (46), и различия оставались значимыми после поправки на количество моноцитов ( p <0.0001 легкое против умеренного и легкое против тяжелого) (Рисунок 1B). Уровни IL6, который секретируется клетками как врожденного, так и адаптивного иммунитета, оставались неизменными между группами при стимуляции in vitro ( p = 0,1247) (рис. 1C). Что касается адаптивного иммунитета, функциональное истощение наблюдалось для лимфоцитов Th27, продуцирующих IL17A, у пациентов с тяжелой формой COVID-19 по сравнению с легкими формами и здоровыми субъектами ( p = 0,0004 и p = 0,002 соответственно) (рисунок 1D).Поразительно, что более низкая секреция IFNγ коррелировала с увеличением тяжести COVID-19 ( p <0,0001) (рис. 1E). Эта более низкая продукция IFNγ оставалась значимой даже после поправки на количество лимфоцитов ( p = 0,0183 легкое против умеренного и p = 0,0009 легкое против тяжелого) (Рисунок 1F).

Таблица 3 . Уровни цитокинов в сыворотке после неспецифической стимуляции Т-лимфоцитов и ДК у здоровых доноров и у пациентов с COVID-19 на исходном уровне.

Рисунок 1 . Уровни цитокинов в сыворотке после стимуляции in vitro клеток врожденного и адаптивного иммунитета у здоровых субъектов и у пациентов с COVID-19 с легкими, умеренными или тяжелыми симптомами. Уровни IFNα ( A : при COVID-19 легкой степени не хватает 3 баллов, при COVID-19 средней степени тяжести — 3 балла, а у пациентов с тяжелой формой COVID-19 — 6 баллов), IL6 ( C : 3, 3 , и 6 баллов соответственно), IL17 ( D ; 3, 7 и 9 баллов соответственно) и IFNγ ( E : 2, 3 и 9 баллов соответственно), а также уровни IFNα и IFNγ были скорректированы на количество моноцитов (B) и лимфоцитов (F) соответственно.Различия между группами сравнивали с тестом Краскела-Уоллиса с использованием апостериорного теста Данна .

Корреляция между продукцией IFNs после

стимуляции in vitro и осложнений, связанных с COVID-19

Уровень продукции IFNα и IFNγ при стимуляции in vitro клеток врожденного и адаптивного иммунитета при поступлении и до специфического лечения прогнозировал риск осложнений ( p = 0,003 и p <0.0001 соответственно) (Рисунки 2А, В). Действительно, у пациентов с уровнем IFNα и IFNγ ниже 2,1 пг / мл и 15 МЕ / мл соответственно, как определено кривой ROC (данные не показаны), с большей вероятностью разовьются осложнения во время госпитализации ( p = 0,0098 и p = 0,0002 соответственно) (Рисунки 2B, D). Как подтверждается также многопараметрическим анализом (таблица 4), стимулированные уровни IFNγ являются независимым предиктором осложнений у пациентов с COVID-19 [ p = 0,0349 OR = 0.98 (0,962; 0,999)].

Рисунок 2 . Прогностическая ценность IFNα и IFNγ после неспецифической стимуляции клеток врожденного и адаптивного иммунитета для пациентов с COVID-19. Уровень IFNα ( A ; n = 55) и IFNγ ( C ; n = 89) различается у пациентов с осложнениями и без них и позволяет прогнозировать выживаемость без осложнений для пациентов с COVID-19. (Б, Д) . Различия между группами сравнивали с помощью теста Манна-Уитни, а для сравнения данных о выживаемости использовали лог-ранговый тест.

Таблица 4 . Многопараметрический анализ для оценки взаимосвязи между рассматриваемыми переменными на исходном уровне и осложнениями.

Эволюция уровней цитокинов в зависимости от клинического результата

Мы дополнительно оценили эволюцию продукции цитокинов и ответа на IFN во время госпитализации в умеренных и тяжелых случаях. Во время последующего наблюдения уровни нестимулированного ИЛ6 в плазме снизились между моментом поступления в больницу и последним перенесенным наблюдением для пациентов с благоприятным исходом ( p = 0.02148) (Рисунок 3A и дополнительный рисунок 1A), в то время как они оставались высокими у умерших пациентов ( p = 0,5625) (рисунок 3B и дополнительный рисунок 1B). Однако уровень IFNγ после стимуляции in vitro существенно не отличался между временем поступления в больницу и последней наблюдаемой временной точкой (рисунки 3C, D), что, вероятно, было связано с небольшим количеством пациентов в группе. . Были выбраны два индивидуальных случая, чтобы лучше продемонстрировать эволюцию продукции цитокинов в течение болезни.Первый случай привел к выздоровлению с повышенными уровнями стимулированного IFNγ в последней точке (дополнительный рисунок 1A), в то время как второй случай привел к смерти со стабильно низкими уровнями стимулированного IFNγ на протяжении всей госпитализации (дополнительный рисунок 1B).

Рисунок 3 . Эволюция уровней цитокинов у отдельных пациентов после их клинического исхода. Уровни IL6 в нестимулированной плазме ( A, B ; n = 13 и n = 6 соответственно) и уровни IFNγ после in vitro неспецифической стимуляции клеток врожденного и адаптивного иммунитета ( C, D ; n = 6 и n = 3, соответственно) сравнивались между пациентами, вылечившимися от инфекции SARS-CoV-2 (A, C) , и умершими пациентами (B , Г) .Различия между группами сравнивали с помощью знакового рангового критерия Уилкоксона для согласованных пар.

Влияние

in vitro Лечение терапевтическими молекулами на восстановление баланса цитокинов

Несколько препаратов, обычно используемых для лечения пациентов с COVID-19, были протестированы на их способность восстанавливать баланс цитокинов in vitro , в частности, увеличивать продукцию IFNγ и снижать продукцию воспалительных цитокинов, сохраняя при этом постоянную секрецию регуляторных цитокинов.Хлорохин и метилпреднизолон оказались эффективными в снижении секреции всех цитокинов (рис. 4), в то время как адалимумаб снижал секрецию только IL6 и IL10. Интересно, что IFNα имел более сбалансированный эффект с сильной стимуляцией IFNγ и уменьшением воспалительного цитокина IL1β, в то время как секреция Т-регуляторного цитокина IL10 и провоспалительного цитокина (IL6) оставалась неизменной. Отдельные результаты подробно описаны в дополнительной таблице 3.

Рисунок 4 . Эффективность лечения in vitro различными препаратами, обычно используемыми при COVID-19 для модуляции экспрессии цитокинов.Уровни IFNγ (A) , IL1β (B) , IL6 (C) и IL10 (D) после предварительной обработки лекарственными средствами in vitro с последующей неспецифической стимуляцией врожденных и адаптивных иммунные клетки у 18 пациентов с COVID-19. Различия между группами сравнивали с тестом Краскела-Уоллиса с использованием апостериорного теста Данна .

Обсуждение

Мы сообщаем здесь о когорте из 101 пациента с симптоматикой инфекции COVID-19. Мы стремились выявить их специфические иммунологические профили и сопоставить их с развитием и степенью симптомов у отдельных пациентов.Наши результаты подтвердили функциональное истощение продукции типа I (NK-клетки и DC) и IFN (T-клетки) типа II у пациентов со средней и тяжелой степенью тяжести, что приводит к уклонению от врожденного и адаптивного иммунного ответа, и в соответствии с недавними исследованиями (14, 16, 18, 21, 47–49).

Хорошо известно, что врожденный иммунный ответ запускается инфицированными вирусом клетками, которые могут распознаваться рецепторами распознавания паттернов хозяина (PRR), экспрессируемыми DC, которые продуцируют различные цитокины (50), такие как IFN типа I, которые в поверните рекрут лимфоцитов и моноцитов в воспаленные участки (51–54).IFN типа I в первую очередь активирует эпителиальные клетки и снижает провоспалительную активность, опосредованную мононуклеарными макрофагами (55). IFN типа II имеют разные функции, вызывая иммунные ответы, управляемые T-хелпером 1 (Th2), а также позволяя индуцированным регуляторным T (Treg) -клеткам контролировать и регулировать иммунные ответы (56). Следовательно, SARS-CoV-2 развил несколько механизмов, чтобы ингибировать индукцию IFN типа I и передачу сигналов (57). Во время инфекции SARS-CoV-2 для успешного выведения вируса требуется как врожденный, так и адаптивный иммунный ответ, и их необходимо адекватно контролировать, чтобы минимизировать иммунопатологические повреждения (57).Оценивая ответ иммунных клеток инфицированных пациентов после стимуляции, мы демонстрируем здесь заметное снижение ответа IFN типа I и типа II от легких до тяжелых пациентов. Молекулярный механизм (ы) этого уклонения от IFN еще предстоит подтвердить, однако в нескольких исследованиях были предложены различные пути, которые могут способствовать снижению количества IFN у пациентов с тяжелой формой COVID-19, от скрытой вирусной продукции, невидимой для PPAR, до прямого синтеза структурные и неструктурные вирусные белки, которые противодействуют передаче сигналов IFN (47–49).Действительно, SARS-CoV-2 индуцировал аберрантный ответ IFN типа I в культивируемых клетках, характеризующийся отсроченным противовирусным ответом, который может обеспечивать окно для репликации вируса и неправильный набор популяций воспалительных макрофагов моноцитов (21).

Оригинальность нашей работы заключается в стимуляции TLR7 и TLR8, которые воспроизводят in vitro, вирусную инфекцию путем активации врожденной иммунной системы и продуцируют IFN типа I (58). С другой стороны, стимуляция Т-лимфоцитов анти-CD3 позволила нам количественно определить продукцию IFN типа II и оценить адаптивный иммунный ответ.Врожденное иммунное распознавание вирусной инфекции запускает противовирусный иммунный ответ остаточной геномной РНК, распознаваемой PRR, экспрессируемой в основном DC (59). У пациентов с COVID-19 средней и тяжелой степени тяжести мы наблюдали, что врожденные клетки вырабатывают меньше IFN типа I, и, следовательно, NK-клетки вырабатывают меньше IFN типа II. В соответствии с предыдущими исследованиями (21, 60), наши результаты показывают, что неконтролируемая инфекция поддерживает активацию моноцитов и макрофагов, и что регуляторные Т-лимфоциты остаются инактивированными из-за слабой продукции IFN типа II, что усиливает цитокиновый шторм и приводит к тяжелые осложнения у пациентов с COVID-19.

Это продольное исследование позволило нам сделать вывод, что функциональный анализ продукции IFN в начале госпитализации является мощным инструментом для прогнозирования клинической эволюции пациентов, инфицированных SARS-CoV-2. В то время как предыдущие исследования продемонстрировали противоположные результаты с нарушением (14, 28) или повышенным (61) ответом на IFN типа I у пациентов с тяжелой формой COVID-19, наши результаты склоняют чашу весов в сторону нарушения передачи сигналов IFN. Согласно нашему исследованию стимулированного производства IFN, а также другим исследованиям (14, 21), IFN типа I играет важную роль в активации IFN типа II и представляет собой стратегическую цель для раннего лечения пациентов с COVID-19, чтобы для уничтожения иммунного уклонения, вызванного SARS-CoV-2, и для лечения специфической иммунной дисфункции.

Однако появляется все больше доказательств того, что пациенты с тяжелой формой COVID-19 могут иметь устойчивый ответ на IFN типа I, который контрастирует с отсроченным, возможно, подавленным ответом на IFN, наблюдаемым на ранней стадии инфекции (27, 62). Ограничиваясь небольшим размером выборки из восьми и семи пациентов соответственно, Zhou et al. и Wilk et al. продемонстрировали, что многие IFN-стимулированные гены сверхэкспрессируются у пациентов с COVID-19 (62, 63).

Поскольку необходимы дополнительные исследования для дальнейшего изучения роли IFN в COVID-19, как с клинической, так и с молекулярной точки зрения, лечение IFN также остается спорным.Тем не менее, исследование in vitro на культивируемых клетках показало потенциальную пользу лечения IFNβ (48), а также недавнее клиническое исследование NCT04276688 с благоприятным исходом для IFNβ (33), в то время как другие все еще продолжаются. Два недавних ретроспективных исследования показали, что лечение IFNα может быть полезным для пациентов с COVID-19 (37, 38), однако кажется, что адекватное время введения IFN имеет решающее значение для его эффективности, поскольку раннее введение снижает смертность, в то время как позднее введение имеет противоположный эффект ( 38).

Наше исследование имеет несколько ограничений. Во-первых, это обсервационное исследование, показывающее связь между уровнями IFN I и II и тяжестью COVID-19 и исходом. Рандомизированные клинические испытания с использованием функционального анализа интерферона при поступлении для прогнозирования исхода необходимы для четкой оценки эффективности и полезности измерения интерферона в клинической практике. Во-вторых, хотя наши тесты in vitro, и несколько недавно опубликованных исследований (33, 37, 38, 48) показывают потенциал лечения IFNα для восстановления цитокинового баланса, результаты, тем не менее, должны быть подтверждены в крупных контролируемых клинических испытаниях.В-третьих, это исследование на относительно небольшом количестве пациентов, которое необходимо подтвердить в более крупных когортах. Примечательно, что в нашей когорте пациентов с COVID-19 было всего шесть смертей, что серьезно ограничивает возможности статистического анализа. В-четвертых, хотя было показано, что мужской пол, пожилой возраст и ожирение тесно связаны с повышенной смертностью пациентов с COVID-19 (10, 11), низкое количество смертей не позволило нам определить эти факторы в нашей когорте. Вместо этого мы проверили прогностическую способность возраста, пола и ИМТ в отношении осложнений, связанных с COVID-19, но, кроме уровней IL6 в плазме и стимулированных уровней IFNγ, другие переменные оставались незначимыми при многомерном анализе.

Изменчивость симптоматики лежит в основе наших клеток среди иммунных ответов, участвующих в борьбе с инфекцией COVID-19. IFNγ представляет собой прогностический биомаркер эволюции SARS-CoV-2, который можно безопасно и регулярно измерять в лаборатории с помощью QuantiFERON Monitor. Это могло бы позволить клиницистам обеспечить скорректированное лечение и медицинскую помощь в условиях эпидемии. Основываясь на наших результатах, наш функциональный тест может быть важным инструментом для прогнозирования тяжелой формы COVID-19 и руководства персонализированной терапией, направленной на восстановление иммунной системы NK и T-клеток (ингибиторы контрольных точек) и выработку IFN.

Заявление о доступности данных

Необработанные данные, подтверждающие выводы этой статьи, будут предоставлены авторами без излишних оговорок.

Заявление об этике

Исследования с участием людей были рассмотрены и одобрены CPP SUD-OUEST et OUTRE-MER I. Пациенты / участники предоставили письменное информированное согласие на участие в этом исследовании.

Вклад авторов

CR, VB, MC, SB и BS-P разработали исследование.В.Б. и М.К. проводили эксперименты. KZ, CF, CR и MC собирали клинические данные. BS-P, CR, VB и MC проанализировали и интерпретировали данные. BS-P, CR, ED, KR, JC, EC, CI, JD и TP обеспечивали медицинский надзор. BS-P, CR и VB подготовили и отредактировали рукопись. Все авторы внесли свой вклад в статью и одобрили представленную версию.

Финансирование

Это исследование было поддержано грантом Департамента приморских Альп и Национальным агентством исследований (ANR).

Конфликт интересов

Авторы заявляют, что исследование проводилось при отсутствии каких-либо коммерческих или финансовых отношений, которые могут быть истолкованы как потенциальный конфликт интересов.

Благодарности

Мы благодарим всех пациентов, участвовавших в этом исследовании, а также Элоди Малле, Жеральдин Дальмассо и Наталью Шозену за их помощь в лаборатории.

Дополнительные материалы

Дополнительные материалы к этой статье можно найти в Интернете по адресу: https: // www.frontiersin.org/articles/10.3389/fmed.2020.603961/full#supplementary-material

Ссылки

1. Ли Кью, Гуань Х, Ву П, Ван Х, Чжоу Л., Тонг И и др. Динамика ранней передачи новой пневмонии, инфицированной коронавирусом, в Ухане, Китай. N Engl J Med. (2020) 382: 1199–207. DOI: 10.1056 / NEJMoa2001316